3T3-L1小鼠脂肪细胞作为一种常用的脂肪细胞模型,在肥胖研究、代谢相关疾病探索以及药物筛选等诸多领域有着至关重要的作用。其提取方法主要包含以下几个关键步骤:
首先,细胞复苏环节不容忽视。从液氮中取出冻存的3T3-L1小鼠前脂肪细胞株,需迅速将其置于37℃水浴锅中,轻柔晃动使其快速解冻,这一过程中要确保冻存管的密封性,防止水浴中的水进入管内污染细胞,待细胞悬液全融化后,用酒精棉球擦拭冻存管外壁进行消毒,随后将细胞转移至离心管中,加入适量的培养基进行离心,去除冻存液中的二甲基亚砜等成分对细胞的潜在损害,离心后弃上清,获得相对纯净的细胞沉淀,再将其重悬于新鲜的培养基中,转移至培养瓶内进行初步培养。

接着,便是细胞的常规培养与诱导分化过程。将复苏后的3T3-L1细胞放置于含有合适血清(如胎牛血清)、葡萄糖以及抗生素的DMEM培养基中,在37℃、5%二氧化碳的细胞培养箱里进行培养。待细胞生长至汇合度达到一定程度(通常约100%)时,便开始进行诱导分化操作。通过更换特定的诱导培养基,一般包含胰岛素以及IBMX等成分,持续作用数天,促使前脂肪细胞向成熟脂肪细胞转化。在这个过程中,要密切观察细胞的形态变化,原本呈成纤维细胞样的前脂肪细胞会逐渐变圆,胞浆内开始出现脂滴,这是脂肪细胞分化的典型特征。
最后,当细胞完成分化后,若需要获取较为纯净的脂肪细胞用于后续实验,可采用消化结合离心的方法进一步纯化。先用适量的消化液处理分化后的细胞,使细胞间的连接蛋白被分解,细胞相互分离,形成单个细胞悬液,然后加入含血清的培养基终止消化,再次离心,经过多次清洗和离心后,就能得到纯度较高的
3T3-L1小鼠脂肪细胞,可用于后续的脂肪代谢相关指标检测、基因表达分析以及药物作用效果评估等实验研究,为深入探索脂肪细胞相关的生理和病理机制提供可靠的细胞模型基础。